磁珠法DNA提取试剂盒中用到的是什么类型的磁珠
磁珠法DNA提取试剂盒中用到的是什么类型的磁珠
磁珠法核酸提取过程：
1、裂解
取抗凝全血到1.5mLEP管中，加入BufferA、BufferB，混合均匀。然后把EP管置于恒温水箱中温育15～20min。
2、结合
将EP管从温育设备中取出，离心后取上清，加入振荡混匀的磁珠结合液，颠倒混匀。将EP管置于磁力架上进行磁分离，弃废液（吸净管盖及管底残液）。
3、洗涤
⑴ 加入洗涤液Ⅰ，点振数次（若有团状或丝状物可增加点振次数及力度），然后磁分离，吸净管盖及管底的残液；
⑵ 加入洗涤液Ⅱ，点振数次（若有团状或丝状物可增加点振次数及力度），然后磁分离，吸净管盖及管底的残液；
⑶ 重复步骤⑵一次；
⑷ 室温下开盖干燥。
4、洗脱
加入洗脱液，放置水浴锅中温育后磁分离，小心吸取上清液至新的EP管中，进行下游实验。
磁珠法血液DNA提取试剂的选择
随着大型医疗机构和检测机构样本量的增多，如何高效快速地进行核酸检测成为研究者关注的重点。目前，医疗机构以及检测机构几乎都会首选血液样本作为检测标本。血液DNA提取方法主要有磁珠法和硅胶膜离心柱法，由于离心柱法满足不了日益增长的大批量样本检测需求，在特定的检测要求下，磁珠法逐渐成为追求自动化作业的工作者进行DNA提取的理想手段。
很多厂家推出了商品化的磁珠法血液DNA提取试剂盒，这解决了很多血液核酸研究者的实际问题。但是，现在大部分的磁珠法血液DNA提取试剂盒都是配套厂家自产的核酸提取仪，那么如何选择一款合适的磁珠法血液DNA提取试剂盒呢？
目前，我们常用的磁珠法血液DNA提取试剂盒主要有进口品牌Q、国内品牌Biog以及国内品牌T。现在我们就这几种磁珠法血液DNA提取试剂盒进行比较。
就磁珠法来说，血液DNA提取试剂盒的性能是我们在选择产品时首要考虑的因素。一般地，DNA提取试剂盒的性能无外乎DNA提取得率、核酸纯度、检测敏感性、操作简便性等。
一、DNA提取得率。对于血液样本，DNA提取得率主要取决于裂解液对样本的裂解消化能力、磁珠对核酸的吸附能力、洗脱液对核酸的洗脱能力。DNA提取得率可以通过紫外分光光度计法测得，但是结果仅供参考，不能作为判断得率的唯一标准，如果要精确检测DNA得率，还是要做PCR或荧光定量的。样本量与DNA得率成正比，结果不理想可以通过增加血液样本量来提高DNA得率。如果样本量的增加还是不能改善DNA得率，那么就应该及时考虑更换试剂盒了。
根据我们实验室的经验，Q公司磁珠法血液DNA的提取得率，一般200ul血液样本在2.6-6ug。Biog与Q的DNA提取得率相近，200ul血液样本在3-5ug；T公司 200ul血液样本DNA得率在4-8ug，基本上都能满足下游PCR实验的要求。
二、核酸纯度。这几个品牌的血液DNA提取试剂盒得到的DNA纯度略有差别，国内品牌Biog和T的核酸提取纯度差不多，可以直接应用于PCR、qPCR、病毒检测、分子杂交等。进口品牌Q的纯度略高，除了以上应用，还可用于对纯度要求略高的实验，如基因分型、二代测序等。目前，血液DNA提取主要应用于易感基因检测、PCR、qPCR、分子杂交等，国产试剂盒Biog、T基本都能满足要求。
三、检测敏感性。经过一段时间的研究，我们实验发现，在同样实验条件下，国内品牌Biog与进口Q提取的血液DNA检测的CT值相差不大，基本控制在1个CT值内；而国产品牌T提取的血液DNA检测CT值较大，一般比Q晚1-2个CT值，检测敏感性不如Biog、Q这两个品牌。
四、操作简便性。由于磁珠法核酸提取需要自动化操作，如果操作过于复杂，不仅耗时，还容易导致样本间的交叉污染，也容易损失样本。特别地，对于临床检测或样本较多情况下的检测，交叉污染会引起误诊，还会影响出检测报告的时间。因而，选用操作简便、流畅的血液DNA提取试剂盒非常重要。以上三种提取试剂盒，Q公司的血液DNA提取试剂盒提取运行过程一般15-20min；T公司血液DNA提取试剂盒整个提取过程需要近1个小时；B公司的Biog磁珠法通用核酸提取试剂盒（特别适用于血液DNA/RNA提取）提取过程只需20多分钟。Q公司和Biog公司磁珠法血液DNA提取试剂盒在操作简便性上具有绝对优势，耗时短，更适合于大批量样本的检测。
五、仪器兼容性。据了解，Biog、T品牌的磁珠法血液DNA提取试剂盒可以手工采用磁力架操作，也可配套多种型号自动化核酸提取仪使用，但是进口品牌Q一般需要配套Q厂家自产核酸提取仪使用。所以，虽然我们实验室有核酸提取仪，也是考虑到进口试剂、耗材昂贵，实验成本高而无奈放弃选用Q公司产品，我们更倾向于选择仪器兼容性好的试剂盒。
六、产品价格。价格也是影响客户选择产品的一个重要因素。对于绝大多数实验如PCR、qPCR、基因检测、分子杂交等，国产试剂盒都能满足质量要求。与国外知名品牌相比，国产试剂盒的价格较为便宜，一般只有国外品牌价格的30%，性价比较高；国产试剂盒Biog比T价格略优。因而，对于以上实验建议选用Biog、T等国产试剂盒。对提取DNA的纯度要求相对较高的一些研究，如基因分型、测序、细胞转染等，可考虑选用Q等国外知名品牌。
综上，国产品牌Biog在检测敏感性、操作简便性、仪器兼容性以及价格上占有很大优势，进口品牌Q在核酸纯度、操作简便性上有一定优势，国产品牌T在DNA得率、仪器兼容性上也有一定优势。我们需要将产品性能和产品价格综合考虑，选择一款真正适合我们实验的试剂盒。以上只是我个人的一些看法，仅供参考，谢谢。
DNA提取试剂盒的使用方法
●操作方法
操作流程见图1，全套操作约需1小时，分匀浆、细胞裂解、除蛋白、DNA纯化等步骤，详细说明如下：
1. 匀浆和细胞裂解。
使用不同的实验材料需采用不同的匀浆步骤，具体说明如下：
【从动物组织中提取基因组DNA】
◆使用研钵进行匀浆时：
① 取1～100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的研钵中，快速用力展研成匀浆。
注）下列组织请加液氮研磨至粉末状。
A．富含DNA酶的胰脏、脾脏、胸腺、淋巴等组织。
B．富含胶原蛋白的皮肤、肌腱等组织。
C．富含角质蛋白的组织或坚硬的组织（如骨骼）等。
② 加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1，温和研磨30秒钟。
注）使用上述①-注）的实验材料时，请在加入Solution A及RNase A1后，将研钵置于65℃水浴上研磨1分钟。
③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆液移至Collection Tube中。如果匀浆体积不足650 μl，请补充Solution A至650 μl，65℃保温5分钟。
◆使用研磨棒进行匀浆时：
① 取1～100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的Collection Tube 中，用研磨棒快速研磨成糊状。
② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成匀浆。
③ 加入350 μl的Solution A将研磨棒上的匀浆冲入Collection Tube中，充分振荡混合后，65℃保温5分钟。
【从植物材料或植物培养细胞中提取基因组DNA】
① 按下表称取适量的新鲜植物材料（如选用的是冷冻干燥植物材料，则用量减半），剪成小块放入研钵中，加入液氮，待样品冷冻完全后快速、用力研磨至粉末状。研磨时应间断加入液氮以防止材料融化。
植物材料种类
植物材料使用量*
植物花、叶片
10～100 mg
植物茎
60～240 mg
植物根
80～240 mg
植物种子
80～240 mg
* 如选取植物的根、种子等样品时，因其基因组DNA含量很低，需使用超过表格中所示的参数用量，此时请分两管进行步骤1～6的实验操作，在步骤7的操作中再将各管溶液分次加入至同一Spin Column中过滤，使各管的基因组DNA结合到同一个Spin Column上。
如从培养的植物细胞中提取基因组DNA，请离心收集2×103～1×107的培养植物细胞，加入150 μl水充分悬浮细胞后移入研钵中，加入液氮后快速、用力研磨至粉末状。
注）样品研磨应充分，否则将会严重影响基因组DNA的收率。
② 将研钵移至65℃水浴，当样品粉末刚开始融化时，向研钵中加入700 μl的Solution A和1.2 μl的RNase A1，用力碾磨30秒。
③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆移至Collection Tube中。如匀浆体积不足650 μl，请补充Solution A至650 μl。65℃保温15分钟。
注）处理富含纤维的根/茎等植物材料或富含淀粉、蛋白质的种子等时，可延长水浴时间至60分钟。
【从全血中提取基因组DNA】
① 取10～250 μl的全血（含抗凝剂）加入至Collection Tube中。
② 加入500 μl的Solution A。
③ 加入1 μl的RNase A1，激烈振荡15秒钟后，冰浴5分钟。
注） 人与动物的抗凝全血的一次处理量为≤250 μl；禽类、两栖类的抗凝全血的一次处理量为≤10 μl。
【从培养细胞中提取基因组DNA】
◆使用悬浮培养的动物细胞时：
① 使用Collection Tube收集1×105～1.5×107的细胞悬浮液，5,000 rpm离心5分钟，弃上清（细胞培养液）。
② 加入150 μl的灭菌蒸馏水或PBS悬浮细胞。
③ 加入500 μl的Solution A和0.8 μl的RNase A1，激烈振荡15秒钟，然后室温静置1分钟。
◆使用贴壁细胞时：
① 弃尽培养液，向培养皿中加入650 μl的Solution A，室温静置1分钟。
注）96孔板等的每个孔中一次容纳不了650 μl 溶液时，请分数次处理细胞。
② 用移液枪的枪头吹落贴壁培养细胞，取650 μl的细胞悬浮液转移至Collection Tube中。
③ 加入0.8 μl的RNase A1，激烈振荡15秒钟，然后室温静置1分钟。
2. 加入400 μl的Solution B，振荡混合。
3. 加入1 ml的4℃预冷的Solution C，充分混匀后，12,000 rpm离心2分钟。
4. 弃去上层有机相，再加入1 ml的4℃预冷的Solution C，充分混匀后，12,000 rpm离心2分钟。
5. 弃去上层有机相，然后将水相溶液（无色下层）转移至置于Collection Tube上的Filter Cup中，12,000 rpm离心1分钟。
注）有机相（上层）带有颜色，请务必除尽，否则会阻碍DNA结合到DNA制备膜上。相间沉淀不必考虑，在过滤时将被去除。
6. 弃Filter Cup，在滤液中加入400 μl的DB Buffer，混合均匀。
7. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。将上述操作6混合溶液转移至Spin Column中，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液。
8. 将500 μl的Rinse A加入至Spin Column中，12,000 rpm离心30秒钟，弃滤液。
9. 将700 μl的Rinse B加入至Spin Column中，12,000 rpm离心30秒钟，弃滤液。
注）请沿Spin Column管壁四周加入Rinse B，这样有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐份。
10. 重复操作步骤9。
11. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column膜的中央处加入50～200 μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1分钟。
注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至65℃使用时有利于提高洗脱效率。
12. 12, 000 rpm离心1分钟洗脱DNA。
如果实验室备有适合于Spin Column接口的负压装置，可从上述操作步骤6完成以后进行以下操作。
7. 将试剂盒中的Spin Column插到负压装置的插口上，将上述操作步骤6的混合溶液转移到Spin Column中，开启调节负压装置，缓慢吸走Spin Column中的溶液（流速控制在1滴/秒）。
8. 将负压调至最大，向Spin Column中加入500 μl的Rinse A，吸尽Spin Column中溶液。
9. 向Spin Column中加入700 μl的Rinse B，吸尽Spin Column中溶液。
注）请沿Spin Column管壁四周加入Rinse B，这样有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐份。
10. 重复操作步骤9。然后从负压装置上取下Spin Column，将其安置于试剂盒中的Collection Tube上，12, 000 rpm离心1分钟。
11. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column膜的中央处加入50～200 μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1分钟。
注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至65℃使用时有利于提高洗脱效率。
12. 12, 000 rpm离心1分钟洗脱DNA。
DNA提取试剂盒的操作方法
全套操作约需1小时，分匀浆、细胞裂解、除蛋白、DNA纯化等步骤，详细说明如下。匀浆和细胞裂解:使用不同的实验材料需采用不同的匀浆步骤，具体说明如下：【从动物组织中提取基因组DNA】使用研钵进行匀浆时：① 取1～100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的研钵中，快速用力展研成匀浆。注）下列组织请加液氮研磨至粉末状。A．富含DNA酶的胰脏、脾脏、胸腺、淋巴等组织。B．富含胶原蛋白的皮肤、肌腱等组织。C．富含角质蛋白的组织或坚硬的组织（如骨骼）等。② 加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1，温和研磨30秒钟。注）使用上述①-注）的实验材料时，请在加入Solution A及RNase A1后，将研钵置于65℃水浴上研磨1分钟。③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆液移至Collection Tube中。如果匀浆体积不足650 μl，请补充Solution A至650 μl，65℃保温5分钟。使用研磨棒进行匀浆时:① 取1～100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的Collection Tube 中，用研磨棒快速研磨成糊状。② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成匀浆。③ 加入350 μl的Solution A将研磨棒上的匀浆冲入Collection Tube中，充分振荡混合后，65℃保温5分钟。【从植物材料或植物培养细胞中提取基因组DNA】① 按下表称取适量的新鲜植物材料（如选用的是冷冻干燥植物材料，则用量减半），剪成小块放入研钵中，加入液氮，待样品冷冻完全后快速、用力研磨至粉末状。研磨时应间断加入液氮以防止材料融化。植物材料种类植物材料使用量*植物花、叶片10～100 mg植物茎60～240 mg植物根80～240 mg植物种子80～240 mg* 如选取植物的根、种子等样品时，因其基因组DNA含量很低，需使用超过表格中所示的参数用量，此时请分两管进行步骤1～6的实验操作，在步骤7的操作中再将各管溶液分次加入至同一Spin Column中过滤，使各管的基因组DNA结合到同一个Spin Column上。如从培养的植物细胞中提取基因组DNA，请离心收集2×103～1×107的培养植物细胞，加入150 μl水充分悬浮细胞后移入研钵中，加入液氮后快速、用力研磨至粉末状。注）样品研磨应充分，否则将会严重影响基因组DNA的收率。② 将研钵移至65℃水浴，当样品粉末刚开始融化时，向研钵中加入700 μl的Solution A和1.2 μl的RNase A1，用力碾磨30秒。③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆移至Collection Tube中。如匀浆体积不足650 μl，请补充Solution A至650 μl。65℃保温15分钟。注）处理富含纤维的根/茎等植物材料或富含淀粉、蛋白质的种子等时，可延长水浴时间至60分钟。【从全血中提取基因组DNA】① 取10～250 μl的全血（含抗凝剂）加入至Collection Tube中。② 加入500 μl的Solution A。③ 加入1 μl的RNase A1，激烈振荡15秒钟后，冰浴5分钟。注） 人与动物的抗凝全血的一次处理量为≤250 μl；禽类、两栖类的抗凝全血的一次处理量为≤10 μl。【从培养细胞中提取基因组DNA】三.使用悬浮培养的动物细胞时：① 使用Collection Tube收集1×105～1.5×107的细胞悬浮液，5,000 rpm离心5分钟，弃上清（细胞培养液）。② 加入150 μl的灭菌蒸馏水或PBS悬浮细胞。③ 加入500 μl的Solution A和0.8 μl的RNase A1，激烈振荡15秒钟，然后室温静置1分钟。四.使用贴壁细胞时：① 弃尽培养液，向培养皿中加入650 μl的Solution A，室温静置1分钟。注）96孔板等的每个孔中一次容纳不了650 μl 溶液时，请分数次处理细胞。② 用移液枪的枪头吹落贴壁培养细胞，取650 μl的细胞悬浮液转移至Collection Tube中。③ 加入0.8 μl的RNase A1，激烈振荡15秒钟，然后室温静置1分钟。2. 加入400 μl的Solution B，振荡混合。3. 加入1 ml的4℃预冷的Solution C，充分混匀后，12,000 rpm离心2分钟。4. 弃去上层有机相，再加入1 ml的4℃预冷的Solution C，充分混匀后，12,000 rpm离心2分钟。5. 弃去上层有机相，然后将水相溶液（无色下层）转移至置于Collection Tube上的Filter Cup中，12,000 rpm离心1分钟。注）有机相（上层）带有颜色，请务必除尽，否则会阻碍DNA结合到DNA制备膜上。相间沉淀不必考虑，在过滤时将被去除。6. 弃Filter Cup，在滤液中加入400 μl的DB Buffer，混合均匀。7. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。将上述操作6混合溶液转移至Spin Column中，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液。8. 将500 μl的Rinse A加入至Spin Column中，12,000 rpm离心30秒钟，弃滤液。9. 将700 μl的Rinse B加入至Spin Column中，12,000 rpm离心30秒钟，弃滤液。注）请沿Spin Column管壁四周加入Rinse B，这样有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐份。10. 重复操作步骤9。11. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column膜的中央处加入50～200 μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1分钟。注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至65℃使用时有利于提高洗脱效率。12. 12, 000 rpm离心1分钟洗脱DNA。如果实验室备有适合于Spin Column接口的负压装置，可从上述操作步骤6完成以后进行以下操作。7. 将试剂盒中的Spin Column插到负压装置的插口上，将上述操作步骤6的混合溶液转移到Spin Column中，开启调节负压装置，缓慢吸走Spin Column中的溶液（流速控制在1滴/秒）。8. 将负压调至最大，向Spin Column中加入500 μl的Rinse A，吸尽Spin Column中溶液。9. 向Spin Column中加入700 μl的Rinse B，吸尽Spin Column中溶液。注）请沿Spin Column管壁四周加入Rinse B，这样有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐份。10. 重复操作步骤9。然后从负压装置上取下Spin Column，将其安置于试剂盒中的Collection Tube上，12, 000 rpm离心1分钟。11. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column膜的中央处加入50～200 μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1分钟。注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至65℃使用时有利于提高洗脱效率。12. 12, 000 rpm离心1分钟洗脱DNA。
