动物细胞培养为什么用液体培养基不用固体的
动物细胞的培养对营养的要求较高,往往需要多种氨基酸、维生素、辅酶、核酸、嘌呤、嘧啶、激素和生长因子等,其中很多成分系用血清、胚胎浸出液等提供,在很多情况下还需加入10%的胎牛或新生牛血清.血清是一种很好的营养物质,绝大多数细胞在含有胎牛或新生牛血清的培养基中生长得最好,但它的来源比较困难,而且它的成分不确定,使得生长过程不易检测控制.任何血清使用前必须经过鉴定,只有无菌、无内毒素、无溶血或低溶血、 蛋白质以及营养素达一定标准以上的血清才能使用.有的细胞,能在无血清培养基中生长.用渐适法可使本来需要血清的细胞适应于在无血清培养基中生长.
动物细胞培养的另一个突出特点,是对环境条件要求严格.所以对这些条件严加控制,可以大幅度促进生长.例如,二倍体成纤维细胞在控制pH的情况下,比在可变pH的情况下生长得好得多.另一方面,动物细胞生长缓慢,它们对环境的影响又比微生物为大,因此常用空气、氧、二氧化碳和氮的混合气体进行供氧和调节pH.这不仅增加了培养的代价,也给过程的检测控制带来了困难.动物细胞培养还需要防治污染问题,细菌、真菌、病毒或细胞均可致动物细胞培养物的污染.而生物的组织材料、操作者自身、培养基、各种器皿以至环境均可引起污染.显著污染的标志是培养基pH值迅速改变,外形模糊,甚至出现漂浮的集落. 污染通常表明操作者技术上的失误或设备及用具出了毛病,特别是小牛血清的支原体污染及组织材料的污染问题更难以对付.
动物细胞培养中,还发现了一个有趣的现象,即大多数哺乳动物细胞是必须附壁即附着在固体表面生长,当细胞布满表面后即停止生长,这时若取走一片细胞,存留在表面上的细胞就会沿着表面生长而重新布满创面.从生长表面脱落进入液体的细胞通常不再生长而逐渐退化,这种细胞的培养称为单层附壁培养.附壁培养的细胞可用胰蛋白酶、酸、碱等试剂或机械方法处理,使之从生长表面上脱落下来.
基于上述原因,我想液体培养基更能满足动物细胞的培养条件吧!当然动物细胞也可以用固体养基培养,比如,最初科学家进行的动物细胞培养,就是将一些神经细胞放在凝固的鸡胚上培养的.
动物细胞培养基中添加饲养细胞的的作用?
添加饲养细胞的作用是促进细胞的发育。动物细胞培养(animal cell culture)就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞(使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶)然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。细胞培养是指细胞在体外条件下的生长,动物细胞在单独细胞培养的过程中不再形成个体。体外细胞培养所需营养物质与体内基本相同,例如,需要糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等。将细胞所需的上述物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基,称为合成培养基。由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚,所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境,因此在使用合成培养基时,通常需加入血清、血浆等一些天然成分。
血清在动物细胞培养中起到哪些作用
血清在动物细胞培养中起着多方面的作用:
①提供细胞生存和增殖所必需的生长调节因子。
②补充基础培养基中没有或量不足的营养成分。
③含有一些可供贴壁细胞型细胞贴壁生长的基质成分。
④提供载体蛋白,可结合维生素、脂质、金属离子等。
⑤在一些情况下,中和毒性物质保护细胞不受伤害。
⑥给培养液提供良好的缓冲系统。
⑦提供蛋白酶抑制剂,保护细胞免受死细胞释放的蛋白酶的伤害。
但是血清也存在一些弊端,比如存在不少有害成分(补体、免疫球蛋白和一些生长抑制因子等);血清成分不明确,影响对结果的分析;不同动物、不同批次的血清成分和活性有很大不同,使得培养结果不稳定。
尽管如此,血清仍然是培养液中最基本的添加物,尤其是在原代培养或细胞生长状态不良时,常常会先使用有血清的培养液进行培养,待细胞生长旺盛后再换成无血清培养液。
血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等,其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。氨基酸有多种,是细胞合成蛋白质的基本成分,其中有些氨基酸动物细胞本身不能合成(称为必需氨基酸),必须由培养液提供。血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子(如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、类胰岛素生长因子等);血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质,能促进细胞的生长、增殖和贴附。因此,细胞培养时,要保证细胞能够顺利生长和增殖,一般需添加10%~20%的血清,动物血清还可起到酸碱度缓冲液的作用。
培养细胞添加血清有什么促进作用
培养细胞用的培养基为人工合成,但动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚,加入动物血清是为了给体外培养的细胞提供一个类似生物体内的环境,此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶,可以促进细胞的发育。主要作用有:
1、提供基本营养物质或合成培养基所缺乏的营养物质:如氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等;
2、提供有利于细胞生长增殖所需的激素、生长因子;
3、提供贴壁细胞所需的贴壁因子和扩展因子;
4、对培养中的细胞起到某些保护作用:有一些细胞如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用,使细胞免受蛋白酶的损伤;
5、血清还含有一些微量元素和离子,他们在代谢解毒中起重要作用;
6、血清中的结合蛋白还可消除某些毒素和金属对细胞的毒性作用。