质粒提取试剂盒

质粒小量提取试剂盒常见问题与解析

质粒小量提取试剂盒常见从1～4mL菌液可以抽提到5～30µg的质粒，纯度高，OD260/OD280比值一般为1.8-2.0之间，质粒可直接用于PCR、酶切、转化测序和体外转录等后续实验。那么在实验过程中常见问题有哪些，下面跟我一起来看一下。


质粒小量提取试剂盒质粒得率低可能原因及解决办法：

1、菌体未活化，生长效率低，菌量少。需要活化菌种。

2、属于低拷贝质粒，增加菌液的量。

3、SolutionB裂解不充分，室温静置5min。

4、最后洗脱体积不够，洗脱液不少于50µL。

质粒小量提取试剂盒质粒纯度差可能原因：

1、SolutionA未加入RNaseA或加入RNaseA的SolutionA 未4℃保存。

2、加入SolutionB剧烈震荡，使得基因组断裂。

3、加入BufferN操作慢，形成微小沉淀，蛋白质无法被充分漂洗干净。

4、BufferW2未加入无水乙醇。

5、OD260/OD280比值一般在1.8-2.0之间，小于1.8可能有蛋白污染，大于2.0有部分降解或RNA污染。

小量一次提取质粒DNA的原理是什么？

小量提取质粒DNA的原理主要包括:1. 裂解细胞和核糖体,释放出质粒DNA。常用SDS和蛋白酶K破坏细胞结构,裂解细胞和核糖体,释放出各种DNA,包括质粒DNA、宿主染色体DNA等。2.去蛋白。添加洗脱液如酚/氯仿等有机溶剂,可以去除相关蛋白质,留下DNA。3.沉淀DNA。加入苏木素和异丙醇,可以使DNA选择性沉淀,此时质粒DNA和宿主DNA会同时沉淀。4.选择性吸附。使用硅柱等吸附质粒DNA,洗脱掉宿主DNA。硅柱对质粒DNA和宿主DNA有不同的亲和力,可以选择性吸附质粒DNA,洗脱宿主DNA。5.洗脱和浓缩DNA。用TE缓冲液等缓冲液洗脱硅柱,收集质粒DNA。可选用离心浓缩,得到小体积的质粒DNA溶液。6.可选的 PCR扩增。如果所得 DNA 浓度不够,可以使用 PCR 扩增获得更高浓度的质粒 DNA。所以,该方法通过裂解细胞,去蛋白,选择性沉淀和吸附等原理,实现了小量质粒DNA的提取,并通过 PCR达到了较高浓度,这就是小量提取质粒DNA的原理。

用小剂量质粒提取试剂盒提取质粒前要做什么工作？

各公司的质粒提取试剂盒大同小异，你这个说明书可能是宝生物的试剂盒。
用试剂盒提，准备工作都比较简单：
1，摇菌；
2，准备ddH2O，无菌枪头和离心管；
3，检查溶液1是否加了Rnase，以及wash buffer是否加了无水乙醇；
3，现在天气冷，检查buffer是否有沉淀，有sds的buffer可能有会有析出，提前开水浴锅，温浴，此外，最后一步加TE或水洗脱质粒时，为提高收获量，在离心前，将柱子在50℃水浴2min更好。
若有疑问，欢迎继续讨论，纯属手打，欢迎采纳，祝实验顺利！

谁能推荐个质粒大量提取试剂盒

博凌科为的质粒大量提取试剂盒蛮不错的，我们实验室现在一直在使用

他们的这款试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：

1、离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2、不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。快速、方便，从100-200ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.2-0.5mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80 %左右。
3、获得的质粒产量高、超螺旋比例高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。